分子生物学实验

逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR)

定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也称实时PCR(Real-time PCR)或者实时定量PCR，是指借助荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR指数扩增期间实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化，从而对目的基因进行定量分析的PCR检测技术。

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量，然后 得出对于内参基因的目的基因的相对量。通过比较样品中目的基因反转录之后的 DNA 量来研究不同样品间的 mRNA 表达量情况。内参基因通常选用 β-actin 或 GAPDH。通过同时对内参基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细 胞数不同或 RNA 提取效率不同等造成的 RNA 量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的 mRNA 表达量进行分析的目的。

双荧光素酶实验

双荧光素酶报告基因实验系统采用荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统。实验中，报告基因（荧火虫荧光素酶）活力的改变，与基因表达的特定实验条件相关；而示踪基因（海肾荧光素酶）作为内对照，使测试不被实验条件变化所干扰，减少内在的变化因素所削弱的实验准确性，如，培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等。荧火虫荧光素酶和海肾荧光素酶测试的组合，提供了双遗传报告基因应用的理想测试系统。

使用双荧光素酶实验可检测miRNA与预测靶点的相互作用或转录因子与启动子的相互作用。